KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ D-DIMERU

Hejduková M., Hirmerová J., Martínková I., Vykoupilová M., Drozdová P., ?ev?íková J. OKH, FN Plzeň D-dimer je významný plazmatický protein, který je během fibrinolytického procesu uvol?ován do cirkulace. Proteolytická degradace zesí?ovaného fibrinu plasminem představuje ochranný mechanismus namí?ený proti tromboze tím, že obnovuje průtok krve v ?ilách po odstran?ní usazenin fibrinu. Molekula D-dimeru se skládá ze dvou D-domén z přilehlých fibrinových jednotek, propojených kovalentní glutamil-lysilovou vazbou mezi jejich g - řetězci. Právě tato kovalentní vazba ve struktu?e d-dimeru způsobuje jeho odolnost proti ?t?pení plasminem. Molekulová hmotnost D-dimeru je 182 000 dalton?, biologický poločas molekuly je 4 - 6 hodin in vivo.
V krevním ?e?i?ti jsou normáln? přítomny obvykle nedetekovatelné úrovn? D-dimeru. Avšak při určitých klinických stavech, např. po trombotické události, při DIC, malignitách, infekcích, zán?tlivých chorobách, po operacích a v těhotenství, se objevuje zvýšení hladiny D-dimeru v cirkulaci. Vzhledem k tomu má test na D-dimery malou specifitu a nízkou pozitivní prediktivní hodnotu, ale je však velmi citlivý a má vysokou negativní prediktivní hodnotu v diagnose žilního tromboembolismu. Jednou z možností využití kvantitativního stanovení D-dimeru je proto potenciální vylou?ení diagnosy žilní tromboembolie neinvazivní metodou. Metody detekce D-dimerů jsou zalo?eny na monoklonálních protilátkách, které rozli?ují epitopy na D-dimerových fragmentech. Určité protilátky použité v komer?ních testech však mohou kŕi?n? reagovat s fibrinogenem a jeho deriváty, což může vést k fale?n? vysokým úrovním D-dimerů a to tedy znamená, že různé D-dimerové testy budou mít nestejné rozsahy normál? a odli?n? definované abnormální výsledky testů. Proto pochopení konstrukce testu a specifity protilátky je dôležité při interpretaci výsledkŕ a porovnávání koncentrací D-dimerů získanými odli?nými metodami. Přesnost klinického použití D-dimerových testů závisí na dvou hlavních charakteristikách monoklonální protilátky použité v testu. Jedná se o fibrinovou specifitu a senzitivitu dané monoklonální protilátky.Nejlep?ích výsledkŕ tedy může být dosaženo za současného použití monoklonální protilátky s vysokou afinitou k D-dimeru a minimální kŕí?ovou reakcí s fibrinogenem a jeho deriváty.
Cílem této práce bylo porovnat 3 principieln? odli?né metody stanovení D-dimerů z hlediska senzitivity, specifity, negativní prediktivní hodnoty a pozitivní prediktivní hodnoty na souboru pacientů s příznaky žilní tromboembolie ( VTE). 140 pacientům (77muž?m a 63 ?enám) ve věku od 20 do 71 let byla kvantitativn? změřena koncentrace D-dimerů v plazm? latexaglutinašní metodou a tzv. rychlou ELISOU. Zároveň v?em t?mto pacientům byl orientažn? stanoven semikvantitativní latexový test. 78 náhodn? vybraným pacientům byla hladina D-dimerů stanovena s využitím konven?ní ELISY, která je považována za referenční standard.U všech testovaných metod jsme zároveň ov??ili firmou doporučované cutoff použitých reagencií.
Stru?ná charakteristika testovaných reagencií:
1. Auto Dimertest Micro ( firma Agen), latexový aglutinašní kvantitativní test využívající vysoce specifickou D-dimer monoklonální protilátku DD - 3B6/22 s turbidimetrickou detekcí precipitátu, cutoff doporučené firmou: 150ng/ml DD
2. Vidas D-dimer test ( firma bioMérieux), rychlá ELISA, imunoenzymatická metoda sendvi?ového typu využívající monoklonální protilátku P10B5E12 a P2C5A10 ve dvou krocích s kone?nou fluorescen?ní detekcí, firemní cutoff: 500ng/ml FEU (fibrinogen ekvivalentní jednotky)
3. Dimertest EIA Gold ( firma Agen) pro kvantitativní stanovení D-dimerů v plazm?, který reprezentuje klasickou ELISU s využitím specifické protilátky DD-3B/22, doporučené cutoff: 120ng/ml DD
4. ( Agen Dimertest, semikvantitativní latexový test pro stanovení D-dimerů s použitím monoklonální protilátky DD - 3B6/22, s cutoff 200ng/ml DD)
Z našich výsledkŕ jednoznašn? vyplývá, že nejvyšší senzitivity ( 100%) a nejvyšší negativní prediktivní hodnoty (100%) bylo shodn? dosaženo při použití metod Vidas D-dimer a Dimertest EIA Gold. Z praktického hlediska však zůstává použití klasické ELISA metody omezené vzhledem k tomu, že je finan?n? náročná, pracná a výsledky nejsou dosažitelné denně. Proto se nám jeví Vidas D-dimer test, který je časov? podstatn? méně náročný, jako nejvhodn?j?í.